ПЦР: наборы, миксы, ферменты

Поставляются в виде 100 мМ раствора в воде как наборами по 4 нуклеотида, так и по отдельности, нуклеотиды очищены ионнообменной колоночной хроматографией.

Условия хранения: -20 °С, допускается транспортировка в температуре окружающей среды.

Полимераза высокопроцессивна, позволяет амплифицировать фрагменты длиной до 10 тыс пар оснований, для работы фермента необходимы ионы Mg2+, в интервале концентраций 0,5-6 мМ. Рекомбинантная форма, выделенная из E. coli. Буфер хранения: 10 мМ К-фосфатный буфер, pH 7,4 (при 25 °С), 100 мМ KCl, 0,1 мМ ЭДТА, 0,1 % Твин-20, 50 % глицерин и 0,1 % Тритон Х-100. Определение единицы активности:за единицу активности принимали количество фермента, катализирующее включение 10 нмоль dNTP в кислотонерастворимый продукт за 30 мин при 70 °С. Условия определения активности:67 мМ трис-HCl, pH 8,8 (при 25° С), 6,7 мМ MgCl2, 1 мМ меркаптоэтанол, 50 мМ KCI, 0,6 мМ активированной ДНК из тимуса, 0,2 мМ каждого из dNTP, 0,4 МВq/ml [3H] dTTP. Каждая партия фермента тестируется на активность, электрофоретическую чистоту в SDS-ПААГ, отсутствие эндонуклеазной и неспецифической экзонуклеазной активности, присутствие бактериальной и эукариотической ДНК. Хранение и транспортировка при -20 °С.

Полимераза с горячим стартом, смесь термостабильного белка, выделенного из рекомбинантного штамма E. coli, несущего ген полимеразы Thermus Aquaticus и специфических моноклональных антител; свободна от бактериальной ДНК. Хранениепри – 20 °С.

50 мM Трис-НCl, рН 8.0 (при +25 °С);

100 мM NaCl;

MMLV-RH обратная транскриптаза;

HS-Taq ДНК-полимераза;

1 мМ ЭДТА;

5 мМ дитиотреитол;

50% (v/v) глицерин;

0,1% (v/v) NP-40.

высокопроцессивную рекомбинантную HS-Taq ДНК-полимеразу с "горячим" стартом;

смесь дезоксинуклеозидтрифосфатов;

ПЦР-буфер;

Mg2+;

красители.

Урацил-ДНК-гликозилаза (UDG) эффективно гидролизует урацил из одно- и двуцепочечных ДНК, но не из олигомеров, оптимальная температура – 37 °С, хранение при -20 °С, срок хранения 2 года. Рекомбинантная форма, выделенная из E. coli. Буфер хранения: 20 мМ трис-HCl рН 8,2, 50 мМ NaCl, 1 мМ ЭДТА, 1 мМ ДТТ; 0,1 мг/мл БСА, 50% глицерина. Хранить при -20 °С. Условия реакции:20 мМ трис-HCl рН 8,2, 1 мМ ЭДТА, 10 мМ NaCl. Определение единицы активности: за 1 единицу приняли количество фермента, необходимое для высвобождения 60 пмолей урацила за 1 минуту из двуцепочечной урацил-содержащей ДНК при 37 °С. Хранение и транспортировка при -20 °С.